PRUEBA CRUZADA MAYOR 21/5/2015

Fundamento

Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante; primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso, y por último frente al suero antiglobulina de Coombs. Con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.

http://www.aibarra.org/manual/General/hemoderivados_archivos/image002.jpg

Material necesario

·         Tubos de hemólisis.

·         Centrífuga.

·         Pipetas Pasteur.

·         Gradilla.

·         Reloj.

Reactivos

·         Solución salina fisiológica.

·         Albúmina bovina al 30%.

·         Suero antiglobulina de Coombs.

Muestra

·         Suero del receptor, obtenido se sangre coagulada y libre de hemólisis. Debe ser fresco (menos de 24 horas desde la extracción) y conservado a 4°C.

·         Hematíes del donante, previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica y resuspendidos en ella al 2-5%.

Técnica

1.       En un tubo de hemólisis depositamos una gota de la suspensión de hematíes del donante y 2 gotas del suero del receptor.

2.       Mezclamos suavemente, y dejamos a temperatura ambiente durante 2-3 minutos.

3.       Centrifugamos a 3.500 r.p.m durante 30 segundos.

4.       Leemos el resultado obtenido en medio salino.

5.       Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina bovina al 30%.

6.       Mezclamos bien e incubamos a 37°C durante 30 minutos.

7.       Centrifugamos a 3.500 r.p.m durante 30 segundos.

8.       Leer el resultado obtenido en medio albuminoso.

9.       Lavamos tres veces los hematíes con solución salina para eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. Retirar bien todo el sobrenadante el último lavado.

10.   Añadimos al tubo una gota de suero antiglobulina humana de Coombs. Mezclar bien.

11.   Centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 2 minutos.

12.   Leemos los resultados.

Enlace en YouTube Prueba cruzada mayor: https://www.youtube.com/watch?v=kpkGII7jw7o

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor? Sangre y suero

2º ¿Cuándo se debe realizar la prueba cruzada menor? Para una transfusión

3º ¿Por qué debemos realizar la prueba en medio salino y albuminoideo? Para detectar los anticuerpos presentes

              4º ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs? Detectamos los anticuerpos                  que se hayan fijado en la membrana