RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITÓMETRO

Material necesario.

·         Un tubo de ensayo

·         Una pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos.

·         Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.

·         Gasas.

·         Una cámara de recuento, con un retículo tipo Neubauer mejorado.

·         Un cubreobjetos

·         Un microscopio, preferentemente, de contraste de fases.

·         Una placa de Petri.

·         Papel de filtro.

Reactivos

·         Agua destilada o desionizada.

·         Líquido de dilución, se recomienda el uso del líquido de dilución suministrado por los Laboratorios Spinreact. Este líquido rompe los hematíes, evita la agregación de las plaquetas entre sí y su adhesión a otros elementos, y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refringentes.

Muestra

·         Sangre capilar o sangre venosa extraída recientemente y recogida en un tubo con EDTA-K3.

Técnica

1.       Verter aproximadamente, 1 ml para cada determinación.

2.       Con una pipeta diluidora de tipo Thoma, aspirar la muestra de sangre, adecuadamente homogeneizada, hasta la señal de 1.

3.       Limpiar, con una gasa, la sangre adherida al exterior de la pipeta.

4.       Aspirar el líquido de dilución hasta la señal de 101 de la pipeta.

5.       Agitar la pipeta, con movimientos de suave inversión, durante unos 5 minutos.

6.       Desechar las 5 primeras gotas de dilución que salen de la pipeta.

7.       Cargar, correctamente, una cámara de recuento, con la dilución de sangre que queda en la pipeta.

8.       Colocar la cámara de recuento cargada, en el interior de la cámara húmeda.

Se puede preparar una cámara húmeda con una placa de Petri cerrada, en cuyo interior se deposita un papel de filtro embebido en agua.

9.       Dejar reposar la cámara de recuento cargada, durante 15 minutos.

10.   Colocar la cámara de recuento sobre la platina del microscopio.

11.   Enfocar uno de los retículos de la cámara de recuento, con un objetivo de bajo aumento (con el de 10 x).

12.   Enfocar uno de los cuadrados grandes del retículo ( por ejemplo, el central), con el objetivo de mediano aumento (con el de 40 x).

13.   Contar la totalidad de las plaquetas depositadas en ese cuadrado grande.

Lectura de resultados

Los trombocitos se observan como corpúsculos redondeados y ovalados, de tamaño muy pequeño y muy refringentes. Hay que procurar no confundirlos con leucocitos, restos eritrocitarios y, sobre todo, con partículas de polvo.

Para calcular el número de plaquetas por mm3 de sangre, se aplica la siguiente fórmula: PLT/mm3 = P x V x D = P x 1.000

PLT/mm3 = número de plaquetas por mm3 de sangre.

P = Número de plaquetas contadas en 1 cuadrado grande.

V = Corrección de volumen (10).

D = Corrección de dilución (100).

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Hoja de Trabajo

1.       ¿Qué tipo de pipeta diluidora se utiliza en el recuento de plaquetas? Con la pipeta de Thoma diluidora para glóbulos rojos

2.¿Qué funciones desempeña el líquido de dilución empleado? 

El líquido rompe los hematíes, evita la agregación de las plaquetas entre sí y su adhesión a otros elementos y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refringéntes.

3.¿Cuánto líquido de dilución se necesita para efectuar un ensayo?

Se necesita un 1ml de líquido aproximadamente.

4.¿Con qué se puede preparar una cámara húmeda?

Se puede preparar con una placa de petri y colocamos dentro un papel de filtro embebido de agua destilada.

5.¿Con qué objetivo se cuentan las plaquetas?

Para determinar si puede haber una enfermedad.

6.¿Cómo se aprecian los trombocitos en este recuento?

Se aprecian como corpúsculos redondeados u ovalados de tamaño pequeño y muy refringentes.

Valoración de los resultados

El número de plaquetas obtenido es:

Normal