PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL 9/3/2015

Fundamento

La prueba de mezcla con el plasma normal se practica, generalmente, cuando en el plasma problema se determina un TP normal y un TPPA alargado.

Para llevarla a cabo, se mezcla, a partes iguales, el PPP problema con PPP normal, y se repite la determinación del TTPA, pero no en el PPP problema puro, sino en la mezcla preparada. Tras lo cual, se incuba la mezcla a 37°C durante 60 minutos.

Material necesario

·         Una gradilla.

·         2 cubetas de coagulómetro.

·         2 trocitos de acero especiales para depositar en el interior de las cubetas.

·         Un rotulador de vidrio de punta fina.

·         Una pipeta automática capaz de dispensar 100 µl.

·         4 puntas de pipeta automática adecuadas para contener 100 µl (las de color amarillo).

·         Un coagulómetro.

·         Un baño de agua ajustable a 37°C.

·         3 tubos de ensayo de plástico.

Reactivos

·         Una solución de cloruro cálcico 0,025 M

·         Una cefalina activada con ácido elágico

·         Un pool de plasmas normales o un plasma control normal

Muestra

·         Un plasma sobre un plaquetas (PPP). A partir del PPP anómalo hay que preparar una dilución a ½ con el pool de plasmas normales o con el plasma normal. Esto puede hacerse de la siguiente forma:

PPP anómalo	100 µL
Pool de plasmas normales o Plasma control normal	100 µL
Dilución	1/2

·         La dilución de la muestra (la mezcla) se ha de incubar a 37°C, durante 60 minutos.

Técnica

1.       Homogeneizar el cloruro cálcico, la cefalina activada y la dilución de la muestra, sin agitarlos bruscamente.

2.       Depositar el volumen total que se va a necesitar del cloruro cálcico, de la cefalina activada y de la dilución de la muestra, en 3 tubos de ensayo de plástico, adecuadamente rotulados.

3.       Atemperar los reactivos, a 37°C durante 5 a 15 minutos.

4.       Tomar 2 cubetas de coagulómetro e introducir un trocito de acero en cada una de ellas.

5.       Rotulador el extremo superior de las cubetas del coagulómetro con las siglas M1 y M2.

6.       Verter 100 µl de la dilución de la muestra en cada una de las cubetas.

7.       Añadir, a lo anterior, 100 µl de cefalina activada (APTT-XL).

8.       Mezclar bien la cefalina activada con el resto del contenido de cada cubeta.

9.       Incubar la mezcla, contenida en cada cubeta, a 37°C, durante 2 minutos. Para ello, pueden depositarse las cubetas en la placa calefactora del coagulómetro.

10.   Colocar, sucesivamente, cada una de las 2 cubetas en la celda de medida del coagulómetro, y agregar 100 µl de CaCl2 0,025 M.

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Hora de Trabajo

1º ¿Cuándo debe hacerse una prueba de mezcla con plasma normal? Cuando a TP normail y TTPA alargado

2º Si tras la mezcla con plasma normal, no se corrige el TTPA, ¿qué se debe investigar?Los factores inhibidores de coagulación