DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO 23/4/2015

Fundamento

Los hematíes problema contienen las sustancias antigénicas del sistema ABO y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos.

El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes.

Material necesario

·         Tubos de centrífuga.

·         Rotulador de vidrio.

·         Pipetas Pasteur.

·         Centrífuga.

·         Gradillas.

Reactivos

·         Suero anti-A.

·         Suero anti-B.

·         Suero anti-AB.

·         Solución salina fisiológica.

Muestra

·         Sangre total anticoagulada. Para esta técnica es preferible usar una suspensión de los hematíes problema.

Técnica

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1.       En primer lugar realizamos el lavado de los hematíes problema. Para ello rotulamos convenientemente un tubo de centrífuga y añadimos 1 ml de la muestra de sangre. Completamos el tubo con solución salina y agitamos para suspender los hematíes. Centrifugamos 4 minutos a 2.000 r.p.m y decantamos el sobrenadante.

2.       A los hematíes del tubo les añadimos una cantidad suficiente de solución salina como para obtener una suspensión al 2%.

3.       Rotular tres tubos de ensayo bien limpios con las letras A, B y AB.

4.       Añadir a cada tubo una gota de la suspensión de hematíes al 2%.

5.       Añadir dos gotas de suero anti-A en el tubo A, dos gotas de anti-B en el tubo B, y dos gotas de anti-AB en el tubo AB.

6.       Centrifugamos todos los tubos durante 1 minuto a 1.000 r.p.m o 30 segundos a 3.000 r.p.m 

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis? Observación en tubo

2º ¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problema? Al 2%

3º ¿Cómo se ve una aglutinación positiva? Cuando se resuspenden

4º ¿A qué se debe el fenómeno de Rouleaux? Consiste en una agrupación no específica de hematíes, que adoptan una imagen de pilas de monedas. Las sustancias que más frecuentemente originan este fenómeno son el fibrinógeno, las gammaglobulinas, el dextrano y la polivinilpirrolidona.

5º ¿Cómo se pueden evitar los falsos positivos? Con el lavado de los hematies problema

Resultados obtenidos

La sangre ensayada es del grupo eritrocitario: B