DETERMINACIÓN DE  Dᵁ 20/5/2015

Fundamento

El Dᵁ es un antígeno D débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación del Rh. Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Dᵁ en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana, en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.

Es una prueba de Coombs indirecta.

Material necesario

·         Tubos de centrífuga o de hemólisis.

·         Centrifuga.

·         Pipetas Pasteur.

·         Gradilla.

·         Baño de agua.

·         Reloj.

Reactivos

·         Suero anti-D humano.

·         Suero antiglobulina humana de conejo (suero de Coombs).

·         Solución salina fisiológica.

Muestra

·         Hematíes de la sangre problema previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica, y suspendidos al 5% en dicha solución.

Técnica

1.       En un tubo de hemólisis colocamos una gota de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5%.

2.       Mezclamos suavemente e incubamos a 37°C durante 30-45 minutos.

3.       Después de incubar, lavamos los hematíes en solución salina fisiológica tres veces consecutivas.

Decantamos completamente la solución salina después del último lavado.

4.       Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs, y mezclamos suavemente.

5.       Centrifugamos el tubo a 1.000 r.p.m durante un minuto.

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué contiene el suero de Coombs? Suero de conejo anti-IgG 

2º ¿Qué se detecta con la prueba directa? Anticuerpos incompletos que sensibilizan a los hematies

3º ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta? Anticuerpos incompletos libres en el suero

4º ¿Qué buscamos en la sangre del paciente? Antigenos D^u

5º ¿Qué ocurre si el control es positivo? Se clasifica como Rh+ D^u