DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA) 4/3/2015

Fundamento

La recalcificación del PPP se realiza mediante la adición de una solución de cloruro cálcico (CaC1₂).

El sustituto del f3p consiste en una suspensión de fosfolípidos, obtenida a partir de cerebros de conejos, que recibe el nombre de cefalina.

En esta prueba, también se añade con la cefalina una sustancia activadora de los factores de contacto. Como activadores de los factores de contacto se pueden utilizar varias sustancias, entre las que cabe destacar: el caolín, el polvo de vidrio, el sílice, el celite y el ácido elágico.

Material necesario

·         Una gradilla.

·         2 cubetas o pocillos de coagulómetro.

·         2 trocitos de acero especiales para depositar en el interior de las cubetas.

·         Un rotulador de vidrio de punta fina.

·         Una pipeta automática capaz de dispensar 100µl.

·         7 puntas de pipeta automática adecuadas para contener 100µl (las de color amarillo).

·         Un coagulómetro.

·         Un baño de agua ajustable a 37°C.

·         4 tubos de ensayo de plástico.

Reactivos

·         Una solución de cloruro cálcico 0,025 M (por ejemplo, la preparada por los Laboratorios Pacific Hemostasis y distribuida por la Casa comercial RAL).

·         Una cafalina activada con ácido elágico (por ejemplo, el reactivo APTT-XL de los Laboratorios Pacific Hemostasis).

·         Un pool de plasmas normales o un plasma control normal (por ejemplo, el Plasma Control Normal de los Laboratorios Pacific Hemostasis).

Muestra

·         Un plasma pobre en plaquetass (PPP), correctamente preparado.

Técnica

1.       Homogenizar los reactivos y la muestra, sin agitarlos bruscamente.

2.       Depositar el volumen total que se va a necesitar de cada uno de los reactivos y el de la muestra, en 4 tubos de ensayo de plástico, adecuadamente rotulados.

3.       Atemperar los reactivos y la muestra, a 37°C de 5 a 15 minutos.

4.       Introducir un trocito de acero apropiado en 2 cubetas del coagulómetro.

5.       Rotular el extremo superior de una cubeta del coagulómetro con la letra M (de Muestra) y el de otra con la letra C (de Control).

6.       Verter 100µl de muestra, en la cubeta M, y 100 µl de plasma control normal, en la cubeta C.

7.       Añadir, a lo anterior, 100 µl de cefalina activada (APPT-XL).

8.       Mezclar bien la cefalina activada con el resto del contenido de cada cubeta. Esto puede realizarse en el momento en el que se añade la cefalina activada, mediante la ejecución de aspiraciones y expulsiones sucesivas de la mezcla, con la pipeta automática.

9.       Incubar la mezcla, contenida en cada cubeta, a 37°C, durante 2 minutos. Para ello, pueden depositarse las cubetas en la placa calefactora del coagulómetro.

10.   Colocar, sucesivamente, cada una de las 2 cubetas, en la celda de medida del coagulómetro, y agregar 100 µl de CaCl₂ 0,025 M.

HOJA DE TRABAJO

1.       ¿De dónde se obtiene el sustituto de f3p? Cerebro de conejo

2.       ¿Cómo se llama el sustituto del f3p? Cefalina

3.       ¿Qué activadores de los factores de contacto se pueden utilizar? Cloruro cálcico

4.       ¿Cuántos segundos debe superar el TTPA de la muestra al del control para ser considerado normal? 8seg