TINCIÓN DE GIEMSA 11/11/2014

 Fundamento.

Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa.

Material necesario.

• Microscopio óptico.
• Portas bien limpios.
• Cristalizador.
• Puentes de tinción.
• Pipetas Pasteur con chupete.
• Frascos lavadores.
• Tubos de ensayo.

Reactivos

• Colorante en solución según Giemsa de Panreac.
• Solución tampón pH 7,2 de Panreac.
• Metanol.
• Aceite de inmersión.

Muestra

Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. El anticoagulante de elección es la heparina o el EDTA, ya que el citrato sódico y el oxalato potásico pueden dar preparaciones defectuosas.

Técnica.

1. Preparamos un frotis sanguíneo según la técnica descrita en la práctica nº VII
2. Colocamos el frotis sobre el puente de tinción, en el cirstalizador y en posición horizontal.
3. Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y lo dejamos secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis.
4. Diluimos en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno de la tinción, ya que el colorante precipita y no es válido par otro día.
5. Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta Pasteur cubrimos el frontis con la dilución de colorante, dejándolo actuar durante 25 minutos.
6. Escurrimos y lavamos con agua del grifo. Posteriormente lavamos con un tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Dejamos escurrir y secamos en posición vertical

Lectura de resultados

Una vez seca la tinción, echamos una gota de aceite de inmersión y examinamos al microscopio óptico.

Los eritrocitos se tiñen de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta.

Los neutrófilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo.