DETERMINACIÓN DE LA SIDEREMIA

Fundamento

En primer lugar, el hierro férrico presente en la muestra y unido a la trasnferrina es liberado por la acción del guanidinio.

Seguidamente, el hierro férrico libre es reducido a ferroso por la hidroxilamina.

Posteriormente, el hierro ferroso reacciona con la ferrozina para producir un complejo coloreado.

Finalmente, la intensidad de formación del complejo coloreado es medida esprectrofotométricamente.

Material necesario

·         4 tubos de plástico de un solo uso.

·         Un rotulador de vidrio.

·         2 pipetas graduadas de 1 ml.

·         1 pipeta automática capaz de dispensar 200 µl.

·         Puntas de pipeta automática.

·         5 cubetas de espectrofotometría.

·         Un espectrofotómetro.

Reactivos

·         Reactivo 1.

Consta de los siguientes componentes:

Cloruro de guanidina                      1M.

Hidroxilamina                                   0,6M.

Tampón acetato                              0,4M.

Muestra

·         Suero o plasma heparinizado.

No son válidas las muestras lipémicas o hemolizadas.

Técnica

1.       Llevar los reactivos, el patrón y la muestra a temperatura ambiente o a 37 ⁰C.

2.       Rotular 4 tubos de ensayo con las siglas BR ( Blanco de Reactivo), P (Patrón), BM (Blanco de Muestra) y M (Muestra).

3.       Añadir a cada tubo lo siguiente:

                                                 

	Blanco de Reactivo BR	Tubo Patrón           P	Blanco de Muestra BM	Tubo Muestra            M
Agua destilada (en ml)	200	-	-	-
Solución patrón ( en ml)	-	200	-	-
Muestra (en ml)	-	-	200	200
Reactivo 1 (en ml)	-	-	1	-
Reactivo de trabajo (en ml)	1	1	-	1

4.       Agitar el contenido de todos los tubos.

5.       Dejar que reaccionen los componentes de todos los tubos, durante 5 minutos, a temperatura ambiente.

6.       Ajustar el espectrofotómetro a 560 nm.

7.       Disponer el contenido de los tubos en cubetas de espectrofotometría.

8.       Leer la absorbancia (A) del contenido del tubo BM (Blanco de Muestra) frene a agua destilada.

9.       Leer la absorbancia (A) del contenido de los tubos P (Patrón) y M (Muestra) frente al contenido del tubo BR (Blanco de Reactivo).

Lectura de resultados

Los cálculos necesarios para obtener, a partir de las absorbancias obtenidas (A), la concentración de hierro en la muestra (la sideremia) son los siguientes:

Sideremia (en µg/dl) = A Muestra – A Blanco de Muestra / A del Patrón ↔ Concentración del Patrón

La concentración del patrón de hierro suministrado es de 100 g/dl.

Si se desea expresar los resultados en µmol/l = Sideremia en µg/dl ↔ 0,179.

Con eta técnica analítica, los valores normales de la sideremia son los siguientes:

Mujeres: 55 – 140 µg/dl.

Varones: 70 – 155 µg/dl.

Hoja de Trabajo

1.       ¿Cuál es el reactivo cromógeno de esta técnica?

Transferrina

2.       ¿Por qué tenemos un tubo BR?

Para poner a cero el espectrofotometro

3.       ¿Qué muestras no son válidas?

4.       ¿En qué unidades se mide la sideremia?

Microgramos/dl

Resultados obtenidos

Anote los resultados de las densidades ópticas (D.O.) obtenidas:

A de la Muestra = 1.570

A del Blanco de Muestra =1.566