ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS HEMATÍES 27/02/15

Fundamento

El estudio de la fragilidad osmótica de los hematíes valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión osmótica* decreciente, en condiciones constantes de pH y de temperatura.

Material necesario

·         Pipeta Pasteur.

·         Tubos de centrífuga iguales entre sí.

·         Un reloj.

·         Una centrífuga.

·         Un espectrofotómetro.

·         Cubetas de espectrofotómetro.

         

·         Una gradilla.

Reactivos

·         Suero fisiológico, preferiblemente, tamponado a pH fisiológico (7,4). Esta solución salina puede prepararse de la siguiente forma:

-          9 g de cloruro sódico (NaCI).

-          2,7 g de fosfato sódico di-básico (Na2HPO4.12H2O).

-          0,2 g de fosfato sódico mono-básico (NaH2PO4.2H2O).

-          1.000 ml de agua destilada.

·         Agua destilada.

Muestra

·         Sangre venos completa y adecuadamente anticoagulada.

Técnica

1.       Preparar una batería de soluciones de cloruro sódico, a concentraciones decrecientes, de la forma que se indica a continuación:

Tubo n⁰	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18
Agua destilada (gotas)	0	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17
Suero fisiológico taponado (gotas)	18	17	16	15	14	13	12	11	10	9	8	7	6	5	4	3	2	1
Concentración obtenida (en gl)	9	8,5	8	7,5	7	6,5	6	5,5	5	4,5	4	3,5	3	2,2	2	1,5	1	0,5

Hay kits comerciales, para la realización de esta prueba, que consiste en una batería de soluciones, tamponadas y estabilizadas, de cloruro de sódico a distintas concentraciones.

2.       Añadir a cada tubo 1 gota (0,5 ml = 50µl) de sangre completa.

Esto ha de hacerse de forma que la gota llegue a la solución de cloruro sódico sin que toque la pared interna del tubo.

3.       Agitar suavemente los tubos.

4.       Dejar los tubos en reposo, al menos 30 minutos, a temperatura ambiente (unos 25 ⁰ C).

5.       Centrifugar los tubos a 2.000 revoluciones por minuto (rpm), durante 5 minutos. En vez de centrifugar los tubos, también se pueden dejar simplemente en reposo, durante 3 horas.

     

Hoja de trabajo

1.       ¿Qué concentración de NaCl tiene el suero fisiológico?

9g

2.       ¿En qué porcentaje se puede incrementar normalmente el volumen de los hematíes sin que éstos se rompan? 70%

3.       ¿Qué sustancia se emplea para anticoagular la sangre en esta prueba? Heparina

4.       En esta prueba, ¿cuál es la concentración salina menor a la que se preparan las soluciones? 0.5g/dl

5.       En condiciones normales, ¿a qué concentración salina suele producirse una hemólisis del 50%? 4 o 4.5 g/dl

6.       ¿En qué enfermedades se produce una disminución de la ROE? En la esferocitosis hereditaria

http://www.fihu-diagnostico.org.pe/revista/numeros/images/2005/jul-set05/137_figura02.jpg