PRUEBA DE LA SACAROSA 27/02/2015

 Fundamento

 La prueba de la sacarosa consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza iónica  (por ejemplo, una solución de sacarosa). En este medio, los eritrocitos tienden a fijar el  complemento, por lo que cuando los glóbulos rojos presentes en la muestra vienen una sensibilidad  anormalmente alta al complemento, tienden a sufrir la acción de éste y, por tanto a lisarse.

 Material necesario

·         Pipeta Pasteur.

·         Pipetas graduadas ( 1 de 5 ml. 2 de 2 ml y 3 de 0,5 ml).

·         Una pipeta automática capaz de dispensar 0,1 ml (100 µl).

·         Puntas de pipeta automática.

·         6 tubos de centrífuga.

·         Un reloj.

·         Una centrífuga.

·         Un espectrofotómetro.

·         Cubetas de espectrofotómetro.

·         Un rotulador de vidrio.

·         Una gradilla.

Reactivos

·         Solución acuosa de sacarosa (azúcar común) a una concentración del 9,24%.

·         Sangre control. Ésta ha de ser normal y tiene que haber sido extraída recientemente.

·         Solución acuosa de amoniaco a una concentración del 0,04%. Ésta puede prepararse, por ejemplo, de la siguiente forma:

-          0,2 ml de hidróxido amónico (NH40H) al 20%.

-          99,8 ml de agua destilada.

·         Suero fisiológico (solución salina al 0,9%).

Muestra

·         Sangre venosa, completa y anticoagulada con oxalato cálcico, EDTA o ACD (ácido cítrico-dextrosa).

Técnica

1.       Rotular 3 tubos. Uno con las sigas SF ( de suero fisiológico), otro con las siglas SC ( de sangre control) y otro con las siglas SP ( de sangre problema).

2.       Rellenar estos tubos según las indicaciones del cuadro siguiente:

	Tubo SF	Tubo SC	Tubo SP
Suero fisiológico  (en ml)	1,8
Solución de sacarosa (en ml)		1,8	1,8
Sangre problema (en ml)	0,2		0,2

3.       Agitar, suavemente, los tubos.

4.       Dejar los tubos en reposo, a temperatura ambiente y durante 30 minutos.

5.       Centrifugar los tubos a 2.000 rpm durante 5 minutos.

Hoja de Trabajo

1.       ¿Con qué solución se hemolizan los hematíes vertidos en el tubo problema? Con la solución de amoniaco

2.       ¿A qué concentración se prepara la solución de sacarosa? A una concentración del 9'24%

3.       ¿Cómo se llama también la sacarosa? Azúcar.

4.       ¿Qué es el ACD? Ácido cítrico-dextrosa.

5.       ¿Cómo se prepara el tubo blanco? Con 5 ml de solución de amoniaco y 0'3 ml de suero fisiológico.

6.       ¿Qué porcentaje de hemólisis suele producirse, con la prueba de la sacarosa, en la sangre de la HPN? Entre un 10 y un 85%