PRUEBA CRUZADA MAYOR 21/5/2015

Fundamento

Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante; primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso, y por último frente al suero antiglobulina de Coombs. Con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.

http://www.aibarra.org/manual/General/hemoderivados_archivos/image002.jpg

Material necesario

·         Tubos de hemólisis.

·         Centrífuga.

·         Pipetas Pasteur.

·         Gradilla.

·         Reloj.

Reactivos

·         Solución salina fisiológica.

·         Albúmina bovina al 30%.

·         Suero antiglobulina de Coombs.

Muestra

·         Suero del receptor, obtenido se sangre coagulada y libre de hemólisis. Debe ser fresco (menos de 24 horas desde la extracción) y conservado a 4°C.

·         Hematíes del donante, previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica y resuspendidos en ella al 2-5%.

Técnica

1.       En un tubo de hemólisis depositamos una gota de la suspensión de hematíes del donante y 2 gotas del suero del receptor.

2.       Mezclamos suavemente, y dejamos a temperatura ambiente durante 2-3 minutos.

3.       Centrifugamos a 3.500 r.p.m durante 30 segundos.

4.       Leemos el resultado obtenido en medio salino.

5.       Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina bovina al 30%.

6.       Mezclamos bien e incubamos a 37°C durante 30 minutos.

7.       Centrifugamos a 3.500 r.p.m durante 30 segundos.

8.       Leer el resultado obtenido en medio albuminoso.

9.       Lavamos tres veces los hematíes con solución salina para eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. Retirar bien todo el sobrenadante el último lavado.

10.   Añadimos al tubo una gota de suero antiglobulina humana de Coombs. Mezclar bien.

11.   Centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 2 minutos.

12.   Leemos los resultados.

Enlace en YouTube Prueba cruzada mayor: https://www.youtube.com/watch?v=kpkGII7jw7o

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor? Sangre y suero

2º ¿Cuándo se debe realizar la prueba cruzada menor? Para una transfusión

3º ¿Por qué debemos realizar la prueba en medio salino y albuminoideo? Para detectar los anticuerpos presentes

              4º ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs? Detectamos los anticuerpos                  que se hayan fijado en la membrana

DETERMINACIÓN RÁPIDA DE HEMOGLOBINA 21/5/2015

Fundamento

Para determinar la concentración de hemoglobina, justo antes de una donación, es necesario un método rápido aunque no se muy preciso.

Para donantes varones se debe preparar una solución de sulfato de cobre de densidad igual a 1,054 g/cmᵌ, ya que a través de esta solución cae libremente una gota de sangre con Hb a una concentración superior a 13 g/dl.

Para mujeres donantes se debe preparar una solución de sulfato de cobre de densidad igual a 1,052 g/cmᵌ, que a través de esta solución cae libremente una gota de sangre con Hb a una concentración superior a 12 g/dl.

Material necesario

·         Material de extracción de sangre capilar.

·         Un vaso de precipitados de 50 ml.

Reactivos

·         Solución de sulfato de cobre a una densidad de 1,052g/dl. Muestra

·         Sangre capilar adecuadamente recogida.

Técnica

1.       Disponer la solución de sulfato de cobre en un vaso de precipitados de 50 ml.

2.       Recoger una gota de sangre problema.

3.       Dejar caer la gota de la sangre problema, con algo de impulso, sobre la solución de sulfato de cobre.

http://i.ytimg.com/vi/ahN5gAZydh4/maxresdefault.jpg

Hoja de Trabajo

1º ¿Cuál es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener una mujer antes de la donación? 12.5 g/dl

2º ¿Con qué otra solución comparamos la densidad de la sangre? Sulfato de cobre

DETERMINACIÓN DE  Dᵁ 20/5/2015

Fundamento

El Dᵁ es un antígeno D débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación del Rh. Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Dᵁ en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana, en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.

Es una prueba de Coombs indirecta.

Material necesario

·         Tubos de centrífuga o de hemólisis.

·         Centrifuga.

·         Pipetas Pasteur.

·         Gradilla.

·         Baño de agua.

·         Reloj.

Reactivos

·         Suero anti-D humano.

·         Suero antiglobulina humana de conejo (suero de Coombs).

·         Solución salina fisiológica.

Muestra

·         Hematíes de la sangre problema previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica, y suspendidos al 5% en dicha solución.

Técnica

1.       En un tubo de hemólisis colocamos una gota de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5%.

2.       Mezclamos suavemente e incubamos a 37°C durante 30-45 minutos.

3.       Después de incubar, lavamos los hematíes en solución salina fisiológica tres veces consecutivas.

Decantamos completamente la solución salina después del último lavado.

4.       Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs, y mezclamos suavemente.

5.       Centrifugamos el tubo a 1.000 r.p.m durante un minuto.

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué contiene el suero de Coombs? Suero de conejo anti-IgG 

2º ¿Qué se detecta con la prueba directa? Anticuerpos incompletos que sensibilizan a los hematies

3º ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta? Anticuerpos incompletos libres en el suero

4º ¿Qué buscamos en la sangre del paciente? Antigenos D^u

5º ¿Qué ocurre si el control es positivo? Se clasifica como Rh+ D^u

DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA Rh 7/5/2015

Fundamento

Podemos investigar el genotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh.

La existencia o no de estos antígenos en la superficie de los hematíes se detecta por una reacción de aglutinación. Los resultados de estas reacciones se trasladan a una tabla donde podemos ver los posibles genotipos correspondientes.

Material necesario

·         Tubos de centrífuga.

·         Centrífuga.

·         Rotulador de vidrio.

·         Pipetas Pasteur desechables.

·         Gradilla.

Reactivos

·         Suero anti-D.

·         Suero anti-E.

·         Suero anti-C.

·         Suero anti-e.

·         Suero anti-c.

·         Solución salina fisiológica.

Muestra

·         Suspensión de hematíes lavados, al 5% en solución salina fisiológica.

Técnica

1.       Procedemos al lavado de los hematíes y a preparar su suspensión al 5% según la técnica descrita en la práctica LIX.

2.       Rotulamos cinco tubos de centrífuga, cada uno con la letra D, C, E, c y e.

3.       En cada tubo añadimos una gota del antisuero correspondiente y una gota de la suspensión de hematíes al 5%. Homogeneizamos suavemente.

4.       Centrifugamos todos los tubos durante un minuto a 1.000 r.p.m

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS 

Un resultado positivo indica la presencia del antígeno del sistema Rh buscado en ese tubo. El resultado negativo indica lo contrario.

Una vez encontrada la hilera coincidente, se mira en ella el posible o posibles genotipos correspondientes.

Esto es así porque si la sangre analizada es Rh negativa (D-), se puede determinar su único genotipo posible con respecto al sistema Rh. Sin embargo, si la sangre es Rh positiva (D+), existen varios genotipos posibles que dan lugar al fenotipo previamente detectado.

https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEidQ-GXmuaCoDDw9FYXh79gQUnXR-jzqRW1xuZPuXhZirSsvLamYrrGnBCACTcQAPY-vw_n9w4N573h_O19_0wo2miABvdVjF_IvIehdIr1SmivNzmJkM7Fggh16nYyEk6-TIq1Q77tzjDi/s640/tabla+fenotipo+y+genotipo+Rh.jpg

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué antisueros se tulizan en esta técnica?  
           Suero anti-D.

·         Suero anti-E.

·         Suero anti-C.

·         Suero anti-e.

·         Suero anti-c.

2º ¿Por qué no existe suero anti-d? Porque el antígeno es nulo

3º ¿Qué expresan los cinco resultados obtenidos? El fenotipo

4º Si la sangre es Rh+, ¿puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh? No se puede

5º Si los resultados obtenidos son: D-, C-, E+, c+ y e-; ¿cuál es el genotipo posible de esta sangre? dcE/dcE

Resultados obtenidos

Tubos	Aglutinación
D	-
C	+
E	+
C	+
E	+

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN TUBO 5/5/2015

Fundamento

Al igual que en la prueba en portaobjetos, intentamos poner de manifiesto la presencia del antígeno D en la superficie de los hematíes median su enfrentamiento a un suero anti-D.

Material necesario

·         Tubos de centrífuga.

·         Rotulador de vidrio.

·         Gradilla.

·         Pipetas Pasteur.

·         Centrífuga.

Reactivos

·         Suero anti-D.

·         Albúmina bovina al  30%.

·         Solución salina fisiológica (al 0,9%).

Muestra

·         Hematíes problema preparados en suspensión al 5%.

Técnica

1.       Rotulamos dos tubos limpios con las letras D y A.

2.       En el tubo D añadimos una gota de suero anti-D y el tubo A ponemos una gota de albúmina bovina al 30%.

3.       A cada tubo le añadimos una gota de la suspensión de hematíes al 5%. Agitamos suavemente para mezclar el contenido de los tubos.

4.       Centrifugamos durante 1 minuto a 1.000 r.p.m o 30 segundos a 3.5000 r.p.m.

http://hemolaguna.com/wp-content/uploads/2011/11/Analisis-y-Almacenamiento2.png

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS

Si el tubo D presenta aglutinación y el tubo A no, decimos que el paciente es Rh positivo.

Si no se produce aglutinación en ninguno de los dos tubos procedentes a incubar ambos a 37°C durante media hora. Posteriormente centrifugamos a 1.000 r.p.m durante un minuto y observamos si existe o no aglutinación.

En el caso de persistir la negatividad comprobaremos que el paciente no posee un Dᵁ (D débil) mediante una prueba de Coombs indirecta.

Si después de todos estos pasos el resultado es la no aglutinación, informaremos que el paciente es Rh negativo.

Hoja de Trabajo

1º ¿Por qué utilizamos el control de albúmina? Porque es un control negativo que nunca debe dar aglutinación

2º ¿Qué ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D? Se continua con mas estudios, se incuba durante 30 min a 37ºc y despues se realiza la prueba del D debil

3º ¿Qué debemos detectar mediante un Coombs indirecto? Anticuerpos libres incompletos

4º ¿Cómo se prepara la muestra problema? Al 5%

Resultados obtenidos

	Aglutinación
Sección S	-
Sección A	-

La sangre analizada es: Rh negativo

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN PORTA 5/5/2015

Material necesario

·         Portaobjetos.

·         Pipetas Pasteur.

·         Rotulador de vidrio.

·         Palillos agitadores.

·         Visualizador luminoso.

Reactivos

·         Suero anti-D.

·         Albúmina bovina al 30%.

Muestra

·         Sangre total anticoagulada.

Técnica

1.       Dividir el portaobjetos en dos secciones con el rotulador de vidrio y marcar una con la letra S (suero) y otra con la letra A (albúmina).

2.       En la sección S colocamos dos gotas del suero anti-D, y en la sección A ponemos dos gotas de albúmina bovina al 30%.

3.       Depositamos una gota de sangre en cada una de las secciones y mezclamos con palillos distintos.

4.       Colocamos el porta sobre el visualizador previamente calentado, y lo balanceamos para favorecer la mezcla de sangre y  reactivos.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS

Sección S	Sección A	Interpretación
+	-	Rh positivo
-	-	Rh negativo
+	+	¿?

+ = Aglutinación positiva

- = Aglutinación negativa

¿? = No se puede interpretar

Para confirmar un Rh negativo es necesario realizar la prueba en tubo.

http://k37.kn3.net/taringa/1/4/7/1/3/6//roelhr/354.jpg?6238

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué tipo de muestra empleamos en esta técnica? Sangre total anticoagulada

2º ¿Para qué se utiliza el visualizador? Para poder observar mejor la aglutinación

3º ¿Qué puede dar lugar a falsas aglutinaciones? La presencia de fibrina

4º ¿Qué ocurre si aglutina la sección A? Se repite la prueba

Resultados obtenidos

	Aglutinación
Sección S	+
Sección A	-

La sangre analizada es: Rh positivo

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO 24/4/2015

Fundamento

El suero de un individuo sólo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes- Por ello, al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B, sólo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes.

Material necesario

·         Tubos de centrifuga.

·         Pipetas Pasteur.

·         Baño de agua.

·         Centrifuga.

·         Reloj.

·         Rotulador de vidrio.

·         Gradilla.

Reactivos

http://labdai.com/wp-content/uploads/2013/04/Serigrup_Diana1.png

·         Hematíes del grupo A1.

·         Hematíes del grupo A2.

·         Hematíes del grupo B.

·         Hematíes del grupo 0.

·         Hematíes de la sangre problema.

Muestra

·         Suero obtenido mediante coagulación de la sangre en baño de agua a 37°C durante 20 a 30 minutos.

Técnica

1.       Para evitar falsos negativos por la presencia de complemento activo en el suero, es aconsejable la inactivación previa de la muestra. Esto se realiza manteniendo el suero en un baño de agua a 56°C durante 10 minutos. Con esto evitamos los fenómenos de hemólisis debidos al complemento.

2.       Lavamos tres veces los hematíes propios de la sangre problema con solución salina isotónica.

3.       Rotulamos un tubo de centrífuga con la letra A1, otro con la letra A2, otro B, otro 0 y otro C.

4.       Añadimos a cada tubo dos gotas del suero problema inactivado.

5.       Depositamos una gota de la suspensión de hematíes que se corresponda con la letra del tubo rotulado. En el tubo C añadimos una gota de la suspensión de los hematíes propis de la sangre problema, ya que nos servirá de control negativo.

6.       Agitamos suavemente y centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 1 minuto.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS

El grupo eritrocitario que se asignará, atendiendo a los resultados obtenidos, se puede ver en el siguiente cuadro:

Tubo A1	Tubo A2	Tubo B	Tubo 0	Tubo C	Ac presentes en el suero	Grupo eritrocitario
-	-	+	-	-	Anti-B	A1
- o +*	-	+	-	-	Anti-B y anti-A1*	A2
+	+	-	-	-	Anti-A	B
+	+	+	-	-	Anti-A y anti-B	0
-	-	-	-	-	Ninguno	A1B
- o +*	-	-	-	-	Ninguno o Anti-A1	A2B
+	+	+	+	+	Autoanticuerpos	Ininterpretable

+ = Aglutinación

˗ = No aglutinación

* = Este anti-A1 se encuentra sólo en un 2% de los individuos A2.

Ó = Este resultado se observa sólo en el 25% de los individuos A2B.

Hoja de Trabajo

1º ¿Qué son los hematíes tipados? Hematies lavados con suero fisiologico

2º ¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente? Al 5%

3º ¿Qué clase de muestra se emplea en esta técnica? Suero obtenido mediante coagulación

4º ¿Qué ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación? Se repite la prueba